Wirtszell-Rest-DNA Testung

Detektieren Sie die Rest-DNA von Wirtszellen mittels digitaler PCR mit den MiQuant® Residual DNA dPCR Kits für E. coli, CHO oder HEK-293.

• Robust und hoch sensitiv
• Schneller Workflow, da keine Extraktion notwendig
• Erfüllt die Kriterien von EP, WHO und FDA
• Kompatibel mit dem QIAcuity® dPCR System
• Lyophilisierte Kitkomponenten vereinfachen Transport und Lagerung

Das Testen von Wirtszell-DNA-Rückständen ist ein wichtiger Aspekt der Qualitätskontrolle bei der Herstellung von Biopharmazeutika, einschließlich rekombinanter Proteine, monoklonaler Antikörper und zellbasierter Therapien. Als Wirtszell-DNA ist das genetische Material definiert, das von der Zelllinie stammt, die zur Herstellung des biopharmazeutischen Produkts verwendet wird. Dabei werden häufig CHO, HEK-293 und E. coli Zellen eingesetzt. Selbst nach umfangreichen Aufreinigungsprozessen können Spuren von Rest-DNA der Wirtszellen im Endprodukt verbleiben, was potenzielle Sicherheits- und Zulassungsprobleme aufwirft.

Die WHO, FDA und das Europäische Arzneibuch empfehlen, dass die Rest-DNA Konzentration im Endprodukt weniger als 10 ng/Dosis betragen sollte.

Minerva Biolabs hat einen digitalen PCR-Assay für den Nachweis von Rest-DNA in Wirtszellen von E.coli, CHO und HEK-293 entwickelt - MiQuant® Residual DNA dPCR. Die Analysemethode der digitalen PCR ermöglicht den direkten Einsatz der Probe ohne vorgeschalteter DNA-Extraktion. Zudem ist eine absolute Quantifizierung ohne Standardkurve möglich. Mit Hilfe der dPCR-Validierungsstandards ist es möglich, einen matrixspezifischen Umrechnungsfaktor zu bestimmen, der [Kopien/µl] in [pg/µl] umrechnet, um eine Quantifizierung der Rest-DNA in Übereinstimmung mit den gesetzlichen Richtlinien zu ermöglichen.

In dem Assay werden kurze Multicopy-Targets in den Genomen von CHO (wiederholendes Element, ~ 1 Million Kopien pro Genom), E. coli (7 Genomkopien) und HEK-293 (wiederholendes Element, ~ 1 Million Kopien pro Genom) amplifiziert. Die Länge der Amplikons beträgt < 200 bp und ist damit kurz genug, um auch die Amplifikation von stark degradierter DNA gemäß den Richtlinien sicherzustellen.

Die Kits sind für das QIAcuity® dPCR System konzipiert und enthalten alle erforderlichen Komponenten, einschließlich Taq-Polymerase, Primer, Sonden und dNTPs in einem lyophilisierten Ansatz, den Rehydratisierungspuffer, dPCR Wasser und eine lyophilisierte interne Kontrolle, die falsch negative Ergebnisse durch PCR-Inhibition anzeigt.